CD63-EGFP标记外泌体/外泌体包裹重组外源肽/跨膜肽3包装外泌体的制备

来源：智能 2024年10月12日 12:16

现在瑞禧生命体小编要给大家校订分享的是CD63-EGFP标上外泌体/外泌体袋子重组经年累月蛋白/横跨膜蛋白3包装外泌体的化学合成，一起来看！

肾脏湛内皮细胞会（LSEC)是肾脏驻留蛋白纳方形细胞会，可摄得用门静脉炎中的蛋白物质，抑制肾脏乃至上半身的特异性致病耐受。癌相关联的外泌体另有癌特异或不确定性蛋白，具备激发致病反之亦然和抑制致病耐受的双重作用。由于外泌体尺寸非常大，以往研究者缺少用成像的原理直接注意到外泌体与LSEC的相互作用。

原理

通过致病磁珠分选LSEC，密度梯度离心纳纯小仓鼠尿毒症CT26.WT细胞会培养液相关联的外泌体，紫外光染色剂DiI标上后，采用CLSM直接注意到LSEC 在活体此前泌体的摄得用。技术的发展基因工程原理构建CT26-DsRed/EGFP-Exo遗传工程细胞会，构建CT26-DsRed/EGFP-Exo小仓鼠尿毒症而会荷瘤框架，技术的发展CLSM“三维”研究者在体外状况下LSEC对尿毒症来原外泌体的摄得用。

结果

经anti-CD146致病磁珠分选出的LSEC 在扫描电镜下具上会“窗孔”本体，FCM检查显示CD146+ LSEC中多达80%的细胞会为VWF感染性。LSEC贴壁后，方形上会铺路石由此可知外观。用超速离心法纳炼出的CT26.WT细胞会培养液相关联的外泌体，透射电镜下平庸为具备双层膜本体的鞘馒头，直径在30~100nm之间，Western blot和致病胶体金检查均证实其所另有外泌体的黑色蛋白CD63。紫外光染色剂DiI需要标上外泌体，命名为Exo-DiI。在LSEC培养体系中加人Exo-Dil，CLSM下可见LSEC胞质内很快出现Exo-DiI，方形黑色锥状紫外光，说明了LSEC 在活体可快速摄得用外泌体。经小仓鼠尾用药Exo-DiIl后，化学合成肾脏脏融化烟熏，CLSM下可见anti-VWFFTTC标上的LSEC同Exo-DiI座落肾脏炎湛内相同区域,说明了LSEC可快速摄得用肾脏炎湛中的外泌体。利用anti-CD146致病磁珠分离纳纯LSEC，经anti-vWF-FITC染色四轮驱动CLSM意到，可见LSEC中摄得用有Exo-DiI，更进一步证实LSEC需要快速摄得用流经肾脏炎湛的外泌体。

CT26-DsRed/EGFP-Exo遗传工程细胞会在CLSM下，黑色紫外光蛋白DsRed将细胞会整体标上为黑色，CD63-EGFP将多馒头体标上为蓝色，在交融图像上方形紫色锥状。构建CT26-DsRed/EGFP-Exo小仓鼠尿毒症而会荷瘤框架，得用癌一个组织融化烟熏，CLSM下可见黑色的癌更进一步内实际上CD63-EGFP标上的多馒头体，而无紫外光标上的癌糖蛋白中也实际上CD63-EGFP标上的外泌体，说明了癌更进一步向都能获释外泌体。框架仓鼠门脉炎涂片可检查到炎液中有蓝色的EGFP-Exo外泌体实际上。框架仓鼠肾脏脏融化烟熏可见肾脏湛臀部实际上蓝色的EGFP-Exo外泌体，说明了尿毒症一个组织获释的EGFP-Exo外泌体循门脉炎回流至肾脏脏，被肾脏脏中以外LSEC在内的吞噬细胞会所摄得用。更进一步技术的发展anti-CD146致病磁珠自框架仓鼠分选出LSEC，分置CLSM意到，可见分离纳纯的CD146* LSEC细胞会摄得用了CT26-DsRed/EGFP-Exo癌一个组织相关联的EGFP-Exo外泌体。